骨髓穿刺活检制片质量的探讨
来源：病理之家
作者：蔡秀玲骆新兰张威朱小兰姚军（医院病理科）
造血系统疾病的诊断除了依靠细胞形态的检查外，在很大程度上还得依靠组织学的检查。骨髓穿刺活检的病理诊断，是临床用药的指南。因此，骨髓石蜡切片的质量控制显得相当重要。下面分别从固定、脱钙、切片、烤片、染色等程序，谈谈我们的做法和体会。
一、固定
目的：（1）防止自溶；（2）凝固细胞内的蛋白质、糖、脂肪等；（3）产生不同的折射率；（4）硬化组织；（5）对染料产生不同的亲和力；（6）保存抗原成份。
时间：18～24小时。
要求：组织离体后立即固定。
固定不及时可引起蛋白质的降解，引起染色不可逆的减弱或者消失，甚至与非特异无关的分子结合。
任何组织离体后由于缺血缺氧而发生变性，甚至自溶，腐败。因此，穿刺的骨髓组织必须立即固定。常用的固定液是10%缓冲中性甲醛。但由于临床上多数用10%甲醛，标本送到病理科后马上换成中性甲醛。固定时间可达18--24小时，至少不少于12小时，但固定时间也不能过长。固定时间不足易造成细胞有关成份弥散，时间过长也可导致抗原成分的破坏，免疫组化常以失败告终。
二、脱钙及其处理
骨髓组织是富含钙盐的组织，必须经过脱钙才能制片。
脱钙目的：去除组织中的无机钙盐。
目前常用的脱钙制是酸类脱钙剂，既有单纯的酸类脱钙剂，也有混合的酸类脱钙剂。不论使用哪类脱钙剂，脱钙之前，组织必须充分固定（至少3－4小时），否则易造成组织结构的破坏。最常用的混合酸类脱钙剂是4%盐酸甲醛脱钙固定液：
37～40%甲醛10ml
盐酸4ml
蒸馏水 86ml
脱钙时间：2～4小时（具体视组织含钙量而定）。
脱钙“终点”的判断：手捏富有弹性，无硬的感觉；用取材刀的刀锋轻刮骨髓表面，无明显的沙沙声；用大头针轻刺骨髓能顺利通过。
化学方法：脱钙液5ml+浓氨水1ml+0.5%草酸0.5ml，然后观察有无沉淀，若无沉淀表明脱钙已达终点。
脱钙完毕后，酒精处理：70%酒精泡2—3小时，期间更换2次酒精。
目的：防止组织膨胀，增强染色。
严禁在脱钙液中过夜，否则，将给染色带来影响。如脱钙时间过长，可先用70%乙醇处理，然后再用1%碳酸锂处理，以助着色。
三、切片
要求和标准：（1）切片平整、结构完整；（2）无皱折、无刀痕；（3）细胞尽量单层分布，一般情况下切片厚2um（尤其是急性髓细胞白血病及淋巴瘤累及骨髓的病例）。
切片的技巧：（1）对角包埋；（2）刀口锋利；（3）切片时组织块要够冷。
由于血液病患者的特殊性（发热、贫血、出血感染等）及骨髓组织自身的特殊性--组织硬而脆。掌握切片的技巧尤其重要。医院的病理科已使用一次性刀片。一次性刀片有其独特的优点，但其韧性和硬度远不如钢刀，一个刀口切上十来个蜡块后，刀锋变钝，蜡片皱缩，若这种情况下切骨髓组织，将出现组织挤压现象。为了确保切片质量，切骨髓组织时最好选用新的刀口，切片既完整又薄，切片厚度约为2um较为合适。若切片过厚，细胞重叠，必将影响医生的诊断。
四、捞片
捞片看似简单，但要捞好每一张片，却要有一定的技巧。当每一张切片摊片时，既要让它充分的舒展（以防皱折），又不能让组织散开（细胞极易弥散），就得靠我们的观察及及时捞贴。另外，对捞片水温的掌握也很重要。骨髓组织合适的捞片水温应为47-48℃。骨髓组织因纤维支架少（尤其是增生极度活跃的骨髓组织），水温过低，切片难以展开；水温过高，组织容易散开，其原有的组织结构遭到人为的破坏，对需要计算细胞数目的特殊病变（如再障时计标巨核细胞的数目），此项工作难以进行。
五、烤片
烤片尽量采用恒温烤箱烤片，温度为60—62℃，烤片时间1—2小时。避免用摊片仪烤片及电吹风吹片。前者易致骨髓组织散开而破坏其结构，后者不易掌握温度，易造成组织烤焦。
六、HE染色的控制
采用标准化的染色程序（自动染色机染色）而且单列骨髓染色程序。染色时间：Mayer苏木素25min，伊红1min,人工染色时分化不要过头，每天检查染色质量，以保证切片的完整，无刀痕、振刀；染色鲜艳—核浆对比分明，细胞无固缩、挤压等现象。
另外，为了尽早发出病理报告，网状纤维染色和含铁血黄素染色已作为我科骨髓切片的常规染色，前者用于判断骨髓纤维化程度，后者则反映细胞和间质中铁颗粒情况，对诊断缺铁性贫血帮助很大。做好这两种特殊染色，对诊断有很大的帮助。
